ELISA試劑盒中常用的方法類(lèi)型!

　　ELISA試劑盒中常用的方法類(lèi)型!

　　ELISA是Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay的簡(jiǎn)稱(chēng)，即酶聯(lián)免疫吸附測定，是研究蛋白抗體的重要方法。它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶進(jìn)行直接或間接結合，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應，進(jìn)行定性和定量分析。我們一起聊聊常見(jiàn)的商業(yè)化ELISA試劑盒的方法種類(lèi)以及它們各自的優(yōu)勢和用途：

　　ELISA大致分為五種類(lèi)型：直接法、間接法、競爭法、夾心法、捕獲包被法。在商品化試劑盒中用得比較多的是雙抗體夾心法、競爭法和間接法。

　　雙抗體夾心法是夾心法中的一種主要形式，我們先談?wù)剨A心法吧：

　　夾心法(Sandwich ELISA)分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法：

　　雙抗體夾心法中抗原的2個(gè)不同的抗原表位被兩個(gè)抗體-捕捉抗體和檢測抗體，分別結合。捕捉抗體固定于載體即酶標板上，檢測抗體通過(guò)結合抗原進(jìn)行顯色分析。應用于雙抗體夾心法檢測的捕捉抗體通常是單抗，偶爾有用多抗做為捕捉抗體的情況，但很少見(jiàn)，因為以多抗作為捕捉抗體容易出現交叉反應而降低特異性。檢測抗體通常為多抗，在商業(yè)化的科研試劑盒中經(jīng)常用到生物素標記的山羊多抗，再讓生物素標記的多抗與HRP標記的親和素或者鏈霉親和素結合，然后再加HRP也就是辣根過(guò)氧化物酶的底物，通常是TMB反應顯色，這種方法是在傳統的HRP酶標記抗體的雙抗體夾心法ELISA中引入了生物素-親和素放大系統。

　　不過(guò)也有用單抗做檢測抗體的情況，尤其是在科研中。雙抗體夾心法具有高靈敏度、高專(zhuān)一性的優(yōu)勢，但該法只適用于有多個(gè)結合位點(diǎn)的抗原檢測，主要用于檢測各種大分子抗原——例如在醫學(xué)檢測中測定HBsAg、HBeAg、AFP等疾病相關(guān)的，以及在科研中檢測細胞因子等。由于雙抗體夾心法特異性高，在檢測過(guò)程中有時(shí)會(huì )將樣本和酶標抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應，稱(chēng)為雙抗體夾心一步法，因為操作時(shí)間短，在商業(yè)化生產(chǎn)中有很大優(yōu)勢。但雙抗體夾心一步法要特別注意ELISA中的鉤狀效應(hook ffect)，因為此時(shí)如果樣本中抗原含量過(guò)高會(huì )導致其與固相抗體和酶標抗體均有結合而無(wú)法形成“夾心復合物”，此時(shí)測出的結果將低于實(shí)際含量甚至是陰性結果。因此，如果使用雙抗體夾心一步法測定樣本中抗原含量時(shí)要注意測量的線(xiàn)性范圍，另外使用高親和力的單抗也可削弱鉤狀效應。

　　雙抗原夾心法中抗原被包被于固相，檢測樣本中的抗體結合于抗原后，使用酶標的抗原進(jìn)行結合及后續反應，可以用來(lái)測定樣本中的抗體。雙抗原夾心法的關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，需要根據抗原結構進(jìn)行設計，在醫學(xué)檢驗上測定抗HBsAg抗體采用的就是此法，檢測時(shí)被測樣本不需要稀釋即可直接進(jìn)行測定，故此靈敏度相對而言高于我們隨后要說(shuō)的間接法。

　　競爭法也是一種很常用的方法，一起看看：

　　競爭法是用樣本中的游離抗體/抗原與固相的酶標抗體/抗原競爭性結合的分析方法。當游離抗體(或抗原)濃度越高，則能與固定抗原(或抗體)結合的酶標抗體(或抗原)就越少，后續顯色就越淺，即與對照相比，顯色越淺，表示檢測樣本中抗體(或抗原)含量越高。該法特別適合小分子物質(zhì)的檢測也可用于檢測比較不純的樣本，且重復性好，但是檢測的靈敏度和專(zhuān)一性較差。競爭法測抗原常用于檢測小分子抗原及半抗原，這類(lèi)抗原通常缺乏兩個(gè)以上的識別位點(diǎn)，不適用于雙抗夾心法進(jìn)行測定。該方法在商業(yè)化ELISA試劑盒中被廣泛運用。

　　最-后再說(shuō)說(shuō)間接法，間接法只能用于測定抗體，主要用于疾病的診斷，其優(yōu)點(diǎn)是只需要改變包被抗原，酶標抗體是通用的。間接法使用了二抗增加信號強度，也使抗體的選擇多樣化，然而間接法容易產(chǎn)生交叉反應。

　　ELISA試劑盒中常用的方法類(lèi)型!先和大家介紹到這，如果想要了解更多ELISA試劑盒的信息，可以關(guān)注天津本生生物，專(zhuān)業(yè)給生物醫藥客戶(hù)提供生物實(shí)驗室檢測耗材及試劑，歡迎廣大客戶(hù)來(lái)詢(xún)。