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關(guān)于血清滅活的幾個(gè)問(wèn)題!
1、問(wèn):加到培養基中的血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實(shí)驗了。
2、問(wèn):胎牛血清滅活是56℃30分鐘嗎?
答:如果用于培養大多數的腫瘤細胞,血清般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長(cháng)因子。但是如果用于培養些表面具有補體受體的細胞,如內皮細胞,血清是需要滅活,般是56℃,30min。
3、問(wèn):我要做滋養細胞培養,胎牛血清要滅活嗎?
答:進(jìn)口的般都已滅活,國產(chǎn)的不定,還是滅活下再用較安全。
4、問(wèn):我用病毒上清轉染細胞,培養用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會(huì )影響轉染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會(huì )和病毒相結合,影響轉染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞,病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無(wú)血清培養基加病毒孵育幾小時(shí),目的是什么?
答:血清定要滅活,可以先用無(wú)血清培養基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主結合過(guò)程的干擾,般是2-6小時(shí),根據細胞的狀態(tài)決定。血清不定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活!這要根據實(shí)際情況而定,如果沒(méi)有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。
5、問(wèn):(1)我買(mǎi)的是天津本生的新生牛血清,要滅活嗎?有些說(shuō)法是需要,有些說(shuō)直接解凍后就可以加入到培養基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?
答:關(guān)于血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在定爭議的話(huà)題。大多數實(shí)驗室將血清的熱滅活還是作為常規來(lái)執行,因為有兩個(gè)作用,第yi是滅活補體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實(shí)驗者并沒(méi)有考慮熱處理對血清中的生長(cháng)因子、氨基酸等成分帶來(lái)的負面影響
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