綿羊膠原蛋白III型（Col Ⅲ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒說(shuō)明

　　綿羊膠原蛋白III型(Col Ⅲ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測范圍：96T

　　0μg/L -5μg/L

　　使用目的：

　　本試劑盒用于測定綿羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膠原蛋白III型(Col Ⅲ)含量。

　　實(shí)驗原理

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中綿羊膠原蛋白III型(Col Ⅲ)水平。用純化的綿羊膠原蛋白III型(Col Ⅲ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入膠原蛋白III型(Col Ⅲ)，再與HRP標記的膠原蛋白III型(Col Ⅲ)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膠原蛋白III型(Col Ⅲ)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中綿羊膠原蛋白III型(Col Ⅲ)濃度。

　　綿羊膠原蛋白III型(Col Ⅲ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

　　試劑盒組成
　　1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標試劑 6ml×1 瓶
　　3 酶標包被板 12 孔×8 條 ; 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶
　　5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶
　　7 終止液 6ml×1 瓶; 8 標準品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶
　　9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶; 10 說(shuō)明書(shū) 1 份
　　11 封板膜 2 張; 12 密封袋 1 個(gè)

　　標本要求

　　1.標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

　　2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　7.溫育：操作同3。

　　8.洗滌：操作同5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

　　11.測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

　　綿羊膠原蛋白III型(Col Ⅲ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結：

　　計算

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　綿羊膠原蛋白III型(Col Ⅲ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。

　　3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　4.請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物請避光保存。

　　7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

　　9.本試劑不同批號組分不得混用。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：2-8℃。

　　2.有效期：6個(gè)月

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