牛血管緊張素II（AngII）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫學(xué)診斷。

牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒 試劑盒名稱(chēng)】

牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒 試劑盒用途】

定量牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管緊張素II(AngII)的含量

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被血管緊張素II(AngII)透明酶標包被板中，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中血管緊張素II(AngII)濃度呈正相關(guān)，450nm波長(cháng)下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中血管緊張素II(AngII)含量。

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒 試劑盒組成】

備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2. 標準規格酶標儀

3. 精密移液器及一次性吸頭

4. 蒸餾水

5. 一次性試管

6. 吸水紙

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒操作步驟】

1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。

6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。

7、溫育：重復4的操作。

8、洗板：重復5的操作。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。

10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。

11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長(cháng)測量各孔的吸光值（OD值）。

12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來(lái)計算。最終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數。

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒 樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃），因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2、標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒注意事項】

1、實(shí)驗嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，實(shí)驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

2、酶標包被板開(kāi)封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實(shí)驗誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml，超過(guò)此范圍，為標準曲線(xiàn)延伸計算所得，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（0.1-200ng/ml范圍內），乘以總稀釋倍數即為樣本最終濃度。

6、若顯色過(guò)淺，可適當延長(cháng)底物溫育時(shí)間。

7、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。

8、試劑盒保質(zhì)期內使用，不同批號的試劑不得混用。

9、底物B對光敏感，避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。

【牛血管緊張素II(AngII)ELISA試劑盒操作程序總結】