酶標板(ELISA PLATE)在酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中,參與免疫學(xué)反應的抗原、抗體、標記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類(lèi)、濃度和離子強度、pH值和反應溫度、時(shí)間等條件起著(zhù)關(guān)鍵作用。
根據不同的分類(lèi)標準,酶標板有著(zhù)不同的分類(lèi)。
一、根據孔數,可分為96孔、48孔,其中96孔是現在常用的,因為酶標板就是配合酶標儀用,現在的酶標儀做出來(lái)的最多的是96孔,所以客戶(hù)在購買(mǎi)時(shí)也是要96孔板,廠(chǎng)家也為了適應市場(chǎng)基本上做出來(lái)的就是96孔的。
二、根據其底部的不同,又分為平底的,U型底、V型底。平底的折射率低,適于在酶標儀檢測;U型底的酶標板折射率較高,方便加樣、吸樣、混勻等操作,可以不用放在酶標儀上,直接通過(guò)目測觀(guān)察顏色變化情況,從而判定有無(wú)相應的免疫反應。V底的酶標板可以精確的吸取樣品。
三、根據酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同,又分為高結合力,中結合力和氨基化的。
1) 高結合力
此種酶標板,表面經(jīng)處理后,其蛋白結合能力大大增強,可達300~400ng IgG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類(lèi)酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無(wú)法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。
2) 中結合力
此類(lèi)酶標板經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類(lèi)酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應。該類(lèi)板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
3)氨基化
這種酶標板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類(lèi)酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過(guò)離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過(guò)其它交聯(lián)劑共價(jià)結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類(lèi)板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無(wú)法結合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。
四、另外根據顏色又分為透明、黑色、白色。
透明的是最常用的,用于最一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗。相對于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標板自身會(huì )有光吸收,所以它的信號相對于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測較強的光,如熒光檢測。而白色的酶標板就用于較弱的光檢測,常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標板還可以消弱非特異反應帶來(lái)的問(wèn)題。有些客戶(hù)會(huì )問(wèn),用一般的酶標板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測,回答是不可以的,因為一般從化學(xué)發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說(shuō)各個(gè)方向上同等發(fā)射出來(lái)的。如果用透明的板子,光不僅會(huì )從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來(lái)。很容易的就會(huì )通過(guò)各個(gè)孔之間的間隙和孔壁。這樣的話(huà),光較強時(shí)相鄰孔之間的影響就會(huì )很大,因此不能用透明的酶標板來(lái)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗。
五、現在大家看到的酶標板大多是可以拆卸的,也就是單條可以拆下來(lái),也有固定的板子。單條可拆的的板子其實(shí)可以省下許多錢(qián),因為這樣的話(huà),當你想用新的酶標板時(shí),可以將酶標板條拆下來(lái),買(mǎi)些酶標板條就可以了,只是要考慮要配相同的型號即可。另外,可拆的酶標板可以用來(lái)做體外檢測,方便拆卸。