熒光定量 PCR 耗材如何使用及選擇注意事項 ！

標簽：熒光定量 PCR 耗 本生生物 實(shí)驗耗材 96 孔 PCR 孔板
　　

　　熒光定量 PCR 耗材如何使用及選擇注意事項 ！

本生生物詳解：高通量的 96 孔 PCR 板和 8 聯(lián)管是在聚合酶鏈式反應 (Polymerase Chain Reaction ,PCR) 中，主要作為參與擴增反應的引物、Taq DNA 聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。醫療級聚丙烯 (PP) 材質(zhì)因其的純凈度和穩定性，能更好適應 PCR 反應過(guò)程中反復高低溫設定，并且能夠實(shí)現高溫高壓滅菌操作，常常被用于 PCR 耗材的生產(chǎn)。隨著(zhù)熒光定量 PCR 技術(shù)的普及，該技術(shù)被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫藥等領(lǐng)域，不僅應用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有 DNA，RNA 的研究領(lǐng)域。

如何正確使用 96 孔 PCR 孔板?

>PCR 板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量 PCR 儀 (如伯樂(lè ) CFX 系列，ABI 7500fast 以上型號， Roche 480 系列)，但如果熒光定量 PCR 儀是底部光源的，則應選擇透明的。

>PCR 板根據裙邊設計又可分為無(wú)裙邊、半裙邊和全裙邊三種設計模式，不同廠(chǎng)家的熒光定量 PCR 儀會(huì )設計不同的切角或邊緣凸起，請選擇適合該 PCR 儀的板子。

>PCR 板又分 100ul 體積 (矮板) 和 200ul 體積 (高板)，根據機型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導致數據失真。

> 當使用 96 孔板做熒光定量 PCR 實(shí)驗的時(shí)候，推薦使用光學(xué)膜代來(lái)密封反應孔。正確的封膜方法是：先沿著(zhù) 96 孔板的縱向壓膜，然后橫向，最后沿著(zhù)板的邊緣按壓使之密封。具體手法見(jiàn)下面圖示。

加樣后會(huì )在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應體系內也會(huì )有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專(zhuān)用的微孔板離心機解決上述問(wèn)題。

BUNSEN 本生 PCR 板屬于一次性消耗品，生產(chǎn)一次成型，不建議剪開(kāi)使用容易造成實(shí)驗誤差增加，不能清洗或部分重復利用。不要為了節省一點(diǎn)小錢(qián)，而給實(shí)驗帶來(lái)后續分析上的困擾。

樣本量少，用 8 聯(lián)管做實(shí)驗又該注意哪些呢?

>8 聯(lián)管也分乳白和透明兩種，選擇方式和孔板一樣，根據 PCR 儀的熒光信號采集方式?jīng)Q定。

>8 聯(lián)管同樣也有 0.1 ml(矮管) 和 0.2 ml(高管)，根據 PCR 儀的加熱模塊體積確定。

>BUNSEN 本生 8 聯(lián)管的蓋子一般有光學(xué)平蓋和凸型圓蓋之分，光學(xué)平蓋適用于熒光定量 PCR，圓蓋適用于普通 PCR。

> 使用單管或 8 聯(lián)管做實(shí)驗，并且樣本數量不多的時(shí)候，建議在樣品加熱塊 (TRAY) 上對稱(chēng)地安放樣品，最好是縱向放置，并且優(yōu)先放在第 6 列或第 7 列，然后逐漸向兩邊放置。這樣做的好處是熱蓋壓下來(lái)的時(shí)候不至于發(fā)生傾斜，各個(gè)反應管的受力和受熱都比較均勻，提高孔與孔之間的數據精密性。也可以在加熱模塊四角的位置，放置 4 個(gè)單管平衡熱蓋壓力，避免擴增少量樣本時(shí)出現管子變形的情況。

　　
> 管蓋沒(méi)有蓋好造成 PCR 反應液熱蒸發(fā)，影響反應溫度的準確控制及反應也各成份的濃度，同時(shí)也成為一個(gè)污染源。不但會(huì )因壓蓋時(shí)由于粗心或者用力不均致使部分蓋子變形，而且還會(huì )造成樣品的交叉污染，所以我們推薦用獨立管蓋的 8 聯(lián)管，每管蓋一體，確保樣本獨立反應，避免交叉污染。

BUNSEN 本生通用耗材：深孔板、96 孔硅膠墊、吸頭、封板膜、玻片、試管、量杯、試劑槽、離心管、移液器等。

細胞培養類(lèi)：血清瓶系列、細胞培養玻片、細胞鏟/刮/過(guò)濾器、移液管、細胞培養皿/板/瓶、培養小室。

核酸提取耗材：移液器吸頭系列、深孔板及磁套系列、PCR 管/PCR 板系列、提取管。

試劑包裝類(lèi)：廣口試劑瓶、窄口試劑瓶、保存管、試劑盒、血清、蛋白、抗體/抗原等。

病毒采樣：一次性病毒取樣器/采樣器、唾液采集器等。