本生闡述：ELISA試劑盒該如何操作及怎么計算

　　本生闡述：ELISA試劑盒該如何操作及怎么計算

　　ELISA試劑盒操作步驟

　　1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

　　3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

　　4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

　　8. 操作過(guò)程中除了按照步驟來(lái)操作，我們還需要額外準備酶標儀(450nm)，高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL，37℃恒溫箱以及蒸餾水或去離子水。

　　9. 要注意試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

　　20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

　　ELISA試劑盒實(shí)驗結果計算

　　以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線(xiàn)，并得到直線(xiàn)回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

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