本生帶您了解、小分子化合物(熒光染料)

　　本生帶您了解、小分子化合物(熒光染料)

　　熒光染料是指吸收某一波長(cháng)的光波后能發(fā)射出另一波長(cháng)大于吸收光的光波的物質(zhì)。由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標記，其廣泛應用于熒光免疫，細胞染色等。熒光染料即可以單獨使用，也可以組合成復合熒光染料使用，用于染色體分析、細胞周期、細胞凋亡等相關(guān)研究。另有很多核酸染料在多色染色系統中是非常有用的復染劑，可作為背景對照，標記細胞核使細胞內結構的空間關(guān)系一目了然。

　　常用核酸染料

　　DAPI是結合富含A-T堿基對DNA序列的熒光染料。DAPI是一種能夠與DNA中大部分A，T堿基相互結合的熒光染料﹐常用于熒光顯微鏡觀(guān)測。因為DAPI可以透過(guò)完整的細胞膜﹐它可以用于活細胞和固定細胞的染色。當DAPI與雙鏈DNA結合時(shí)，最大吸收波長(cháng)為358nm，最大發(fā)射波長(cháng)為461nm。DAPI的發(fā)射光為藍色，且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長(cháng)僅有少部分重疊，可以利用這項特性在單一的樣品上進(jìn)行多重熒光染色。

　　一般的，用于細胞核染色時(shí)，推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/mL。

　　Hoechst 33342是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA后釋放強烈的藍色熒光，對細胞的毒性較低。Hoechst 33342染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀(guān)察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342也常用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。Hoechst 33342的最大激發(fā)波長(cháng)為346nm，最大發(fā)射波長(cháng)為460nm;Hoechst 33342和雙鏈DNA結合后，最大激發(fā)波長(cháng)為350nm，最大發(fā)射波長(cháng)為461nm。

　　細胞凋亡檢測

　　JC-1是一種廣泛用于檢測線(xiàn)粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。在線(xiàn)粒體膜電位較高時(shí)，JC-1 聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光;在線(xiàn)粒體膜電位較低時(shí);JC-1不能聚集在線(xiàn)粒體的基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。線(xiàn)粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個(gè)標志性事件。通過(guò)JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降,同時(shí)也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個(gè)檢測指標。

　　活性氧檢測

　　DCFH-DA本身沒(méi)有熒光，可以自由穿過(guò)細胞膜，進(jìn)入細胞內后，可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。

　　ROS熒光探針-DHE

　　DHE是一種可滲透細胞的藍色熒光探針，是過(guò)氧化物指示劑，可用于檢測細胞內superoxide radical anion，能有效地檢測活性氧類(lèi)。這種染料可以自由地進(jìn)入細胞中，脫氫后成為Ethidium。DHE可以直接用于活細胞的標記。DHE被活細胞攝入后，可以在細胞內的超氧化物陰離子作用下脫氫，產(chǎn)生Ethidium。Ethidium可以和RNA或DNA結合產(chǎn)生紅色熒光。當細胞內的超氧化物陰離子水平較高時(shí)，產(chǎn)生的Ethidium較多，紅色熒光就較強，反之則較弱。DHE本身為藍色熒光，最大激發(fā)波長(cháng)為370nm，最大發(fā)射波長(cháng)為420nm，脫氫后和RNA或DNA結合產(chǎn)生紅色熒光，最大激發(fā)波長(cháng)為300nm，最大發(fā)射波長(cháng)為610nm，實(shí)際觀(guān)察時(shí)也可以使用535nm作為激發(fā)波長(cháng)。

　　一般的，用于細胞內超氧化物陰離子檢測時(shí)，DHE的常用濃度為1-10μM。

　　鈣離子濃度檢測

　　Fluo-3 AM是常用的檢測細胞內鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細胞膜進(jìn)入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成 Fluo-3，從而被滯留在細胞內，Fluo-3若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當它與細胞內鈣離子結合后可以產(chǎn)生較強的熒光，最大激發(fā)波長(cháng)為506nm，最大發(fā)射波長(cháng)為526nm。實(shí)際檢測時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(cháng)為488nm左右，發(fā)射波長(cháng)為525-530nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細胞儀檢測細胞內鈣離子濃度的變化。

　　其他染料

　　尼羅紅是一種親脂性的惡嗪類(lèi)熒光染料，與脂類(lèi)物質(zhì)結合并發(fā)出熒光，在激發(fā)波長(cháng)530nm激發(fā)下，顯示強烈桔紅色熒光。常用于檢測細胞內脂滴。

　　Calcein-AM是一種可對活細胞進(jìn)行熒光標記的細胞染色試劑，它穿透細胞膜進(jìn)入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成Calcein，從而被滯留在細胞內，發(fā)出強綠色熒光。Calcein的激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)分別為490nm和515nm。Calcein-AM和PI經(jīng)常被結合用來(lái)作為活細胞和死細胞的雙重染色。

　　FITC是在熒光素的基礎上通過(guò)化學(xué)反應增加(異)硫氰酸基團得到的，硫氰酸基團可以和生物活性物質(zhì)例如蛋白質(zhì)上的伯胺基團反應形成硫脲鍵，從而實(shí)現對生物活性物質(zhì)的熒光標記。FITC能和各種抗體蛋白等物質(zhì)結合，通過(guò)在熒光顯微鏡下觀(guān)察或流式細胞儀分析可進(jìn)行定性、定位或定量的檢測。

　　本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。