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知識分享:超濾離心管常見(jiàn)問(wèn)題
(實(shí)驗操作)
1. 超濾管的膜會(huì )因為離心時(shí)間過(guò)長(cháng)而變干么?
不會(huì ),因為離心管有死體積設計,總會(huì )有溶液殘留在濾管中。
2. 超濾管可以用酒精消毒滅菌么?
本生離心管的裝置與70%乙醇是兼容的,但是對滅菌處理的具體方法沒(méi)有做相關(guān)的測試,所以無(wú)法提供更進(jìn)一步的參考信息。
3. 超濾裝置是否可以用于高壓滅菌?
不可以,BUNSEN本生離心管都是采用熱封設計,不可以用高壓高溫滅菌。
4. Millipore是否提供無(wú)熱源的超濾裝置?
Millipore提供的超濾裝置均非無(wú)熱源的,即使是無(wú)菌裝置也可能包含熱源。
5. 超濾管是否不含RNA酶?
不保證超濾管不包含RNA酶,建議用0.1% DEPC在37度浸泡2小時(shí),以滅活RNA酶。殘留的DEPC可以用超純水洗滌除去。
6. 說(shuō)明書(shū)中推薦在室溫下進(jìn)行離心,考慮到蛋白的穩定性,是否可以在4℃進(jìn)行離心?
可以,但是低溫會(huì )增加蛋白樣品的粘性,導致流速減慢,建議可將離心時(shí)間延長(cháng)到原來(lái)的 1.5倍。
7. 如何對超濾管進(jìn)行去除內毒素的處理?
超濾管是沒(méi)有經(jīng)過(guò)去內毒素處理的,同時(shí)由于內毒素通常以多聚體的形式存在,大小在10-1000KD之間不等,在超濾的過(guò)程中是無(wú)法去除的??稍趯?shí)驗前通過(guò)先用 0.5M NaOH預清洗,隨后用Milli-Q水/緩沖液buffer清洗的步驟去除大部分內毒素。
8. 處理后樣品怎樣收集?
兩種方式:移液槍轉移和反轉離心
(1) 對于15 mL和4 mL的超濾管,可以直接通過(guò)移液槍收集處理后樣品
(2) 對于0.5 mL的超濾管,可以通過(guò)反轉離心的方式收集處理后樣品:將有濃縮樣品的超濾管(內管)倒置于新的離心管中后,低速離心(1,000 g)后將樣品重新離心到新離心管中。
備注:以上信息僅供參考,具體信息說(shuō)明及操作以廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)為準。
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