干貨分享：如何提高ELISA的重現性?

　　如何提高ELISA的重現性?

　　免疫檢測法的性表現為單次實(shí)驗孔間(批內)的重復性和多次實(shí)驗之間(批間)的重復性。CV值高則表明度低，通常由以下兩個(gè)原因造成：移液技術(shù)和洗滌技術(shù)。

　　移液技術(shù)

　　1. 移液時(shí)，槍頭應對準孔中央，避免接觸孔壁及底部。

　　2. 移液后輕輕晃動(dòng)混勻試劑。

　　3. 如果您的樣品具有黏性，請預先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時(shí)等待片刻使體積平衡后再取出。

　　4. 移液不充分或移液體積不均，說(shuō)明移液器需要校正。必要時(shí)請檢查移液器并重新校正。

　　5. 加樣時(shí)，不同的試劑標準品和樣本間都要確保更換槍頭，避免交叉污染。

　　6. 確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無(wú)法正確量取吸液和加樣的體積。

　　洗滌技術(shù)

　　1. 如果使用自動(dòng)洗板機或多通道移液器，請確保進(jìn)出口能正常運作。

　　2. zui后一次洗滌后，翻轉酶標板倒出多余的洗滌液，并在吸水紙上拍干液體。洗板太快或太慢都會(huì )降低度。不能讓孔內液體自然風(fēng)干，需立即進(jìn)行下一步操作。

　　3. 按照說(shuō)明書(shū)，添加足量的洗滌液至孔內，并保證洗滌。

　　4. 由于洗滌液不是通用的，當試劑盒內的洗滌液用完時(shí)，請不要使用其他試劑盒中的洗滌液。如有需要，可聯(lián)系技術(shù)支持尋求幫助。

　　5. 不要減少洗滌時(shí)的浸泡時(shí)間或跳過(guò)浸泡的步驟。

　　6. 按照說(shuō)明書(shū)上推薦的洗滌次數清洗，隨意改變洗滌次數會(huì )影響實(shí)驗的準確性。

　　貯液瓶

　　為避免污染，不同的試劑使用不同的貯液瓶。一些試劑或樣本很容易被污染(比如唾液、氧化劑等)，請參考說(shuō)明書(shū)操作。必要時(shí)候采取一些預防措施保護溶液。

　　封板覆膜

　　使用過(guò)的封板覆膜可能含有上一步實(shí)驗殘留的試劑，如果重復使用會(huì )造成孔板污染。建議每一次孵育使用新的封板覆膜。

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