BUNSEN講解：超濾離心管知識問(wèn)答

　　BUNSEN講解：超濾離心管知識問(wèn)答

　　1、問(wèn)：超濾管的主要用途?

　　答：濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(單株或雙株DNA/RNA樣本)、微生物、洗出液和凈化樣本的生物樣本。

　　2、問(wèn)：如何選擇合適的超濾管?

　　答：通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。

　　3、問(wèn)：超濾管對那些化學(xué)物質(zhì)具有耐受性?

　　答：適用于生物液體及水溶液樣本，具體的一些化學(xué)試劑的相容性，詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。

　　4、問(wèn)：超濾管主要有什么組成?

　　答：括一個(gè)蓋子、一個(gè)過(guò)濾器和一個(gè)離心管

　　5、問(wèn)：超濾管需要預處理嗎?

　　答：新買(mǎi)的超濾管是干燥的并且含有微量甘油?？捎镁彌_液或Millipore水預清洗。如果干擾仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用緩沖液或Millipore水再次清洗后甩干。

　　6、問(wèn)：超濾管可以重復使用嗎?

　　7、答：可以，一般也就用一兩次就換新的，先用緩沖液洗滌，再用去離子水反復洗滌。殘留蛋白雜質(zhì)多時(shí)，可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗，去除和溶解蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)的。然后將超濾離心管的超濾膜泡在疊氮鈉溶液或20%的乙醇溶液中，防止長(cháng)菌，而且防干，一旦潤濕后應避免重新干燥，在干燥會(huì )影響濾膜的孔徑。

　　注意：不可以用超聲洗滌!清洗過(guò)程槍頭一定不能碰到濾膜。

　　8、問(wèn)：如何達到轉速和離心的平衡?

　　答：質(zhì)量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開(kāi)始離心超濾(離心機預冷至4度)。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后，有所不同。具體可參閱附件里的說(shuō)明書(shū)。離心機的加速度調至低檔，減小對膜的壓力。

　　注意：在實(shí)際使用中，一般轉速開(kāi)的比說(shuō)明書(shū)里的要低，這樣可以延長(cháng)離心管的使用壽命。

　　9、問(wèn)：為什么離心過(guò)程會(huì )發(fā)生堵管?

　　答：若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過(guò)高還是緩沖液不合適，若是蛋白濃度可用多個(gè)超濾管同時(shí)超濾，降低蛋白濃度;若是緩沖液不合適，需要跟換合適的緩沖液，直到蛋白不發(fā)生沉淀。

　　10、問(wèn)：超濾管是無(wú)菌的嗎?

　　答：不是

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