ELISA實(shí)驗中不容忽視的實(shí)驗細節

　　ELISA實(shí)驗中不容忽視的實(shí)驗細節

　　ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過(guò)程中除正常反應外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素;②試劑因素;③操作因素。下面就一些常見(jiàn)ELISA操作過(guò)程中的問(wèn)題BUNSEN本生小編一一分析。

　　>> 樣品稀釋

　　酶聯(lián)免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋?zhuān)豢杀苊鈺?huì )產(chǎn)生很強的非特異性反應，出現假陽(yáng)性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來(lái)。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數均通過(guò)大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶(hù)未能?chē)栏癜词褂谜f(shuō)明書(shū)操作，如某些產(chǎn)品應取10μl樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)瑐€(gè)別用戶(hù)取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)捎谖焐喜豢杀苊獾卣从袠悠芬约拔⒘恳埔浩鞯木炔粔?，因此造成樣品稀釋倍數不準確，檢測結果出現問(wèn)題。

　　>> 試劑盒平衡

　　試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃)，一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì )造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對縮短，ELISA反應不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。

　　>> 樣品和試劑的混勻

　　稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。

　　>> 加樣

　　在現在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會(huì )對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現氣泡則反應液界面有差異。所以，有時(shí)候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽(yáng)性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

　　ELISA 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。本生試劑盒 Elisa試劑盒