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知識講解:ELISA實(shí)驗設置陰性、陽(yáng)性和空白對照的重要作用
ELISA檢測,要求嚴格按照試劑說(shuō)明書(shū)要求,每次試驗、每塊扳上都要設置以下3項對照和用途下面我司技術(shù)為您詳細介紹ELISA實(shí)驗設置陰性、陽(yáng)性和空白對照的作用:
1.空白對照:僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀(guān)測zui終反應的顯色“本底"、并用于酶標儀消除、扣除“本底",即:以本底為“零"讀取陽(yáng)性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者,在計算陰性對照均值(NCx)、陽(yáng)性對照均值(PCx)、樣本讀數的S/C.O.值時(shí)減去空白對照的本底吸光值。
2.陰性對照(品):所謂陰性對照(品),應當是本項檢測試驗中采用與待撿物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質(zhì)性,又不含有待檢物質(zhì),并能客觀(guān)比較和鑒別處理因素(血清免疫學(xué)試驗中有特異性抗原與抗體反應)之間的差異。
3.陽(yáng)性對照(品):
(1)陽(yáng)性對照(品)的概念與要求:同陰性對照(品),只是采用“精選"的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選",就是把收集的陽(yáng)性人血清經(jīng)過(guò)數種試驗進(jìn)行“篩試"、把含有“干擾性物質(zhì)"的血清剔除、不用,以避免出現“假陽(yáng)性"干擾試驗結果。
(2)陽(yáng)性對照(品)設置,也可區分為兩種類(lèi)型與用途:
一是陽(yáng)性對照主要用于評價(jià)該項試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性。而所設的陽(yáng)性對照的測量值不列入Cut off值計算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。
二是陽(yáng)性對照的設置,不僅用于評價(jià)試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性,而且計入Cut off的計算。此時(shí)的Cut off值的含義是代表該標志物在健康(正常)人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測值超過(guò)該上限(Cut off)時(shí)表示有診斷意義。
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