ELISA檢測結果不理想的原因?

　　ELISA檢測結果不理想的原因?

ELISA作為經(jīng)典的免疫檢測方法，看起來(lái)很平常，然而真正做好它并不容易。BUNSEN本生專(zhuān)注科研試劑盒的研發(fā)及銷(xiāo)售多年，涉及分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，滿(mǎn)足您實(shí)驗所需，以實(shí)現與客戶(hù)的雙贏(yíng)，完善的庫存及供應體系以及高效穩定的專(zhuān)業(yè)技術(shù)，保證產(chǎn)品均能現貨供應。有哪些方法可以借鑒呢?恒遠技術(shù)人員總結了以下幾點(diǎn)：

一、確定您的樣本類(lèi)型和試劑盒可以兼容

常見(jiàn)樣本類(lèi)型有血清，血漿，細胞培養上清，如果是廠(chǎng)家實(shí)驗驗證過(guò)的，可根據產(chǎn)品說(shuō)明購買(mǎi)使用。

注意：血漿制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種，相應的血漿性質(zhì)存在差異，需單獨確認兼容性

二、試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標志物濃度

elisa試劑盒的定量檢測范圍需參考標準曲線(xiàn)，在標準曲線(xiàn)低和最高濃度區間內屬于線(xiàn)性范圍，其中的值是可信和可定量的。濃度高于線(xiàn)性范圍的樣品要稀釋到線(xiàn)性范圍內來(lái)測量，而濃度低于線(xiàn)性范圍的樣品，其測量值不能用于計算濃度，只能用做參考。有一種常見(jiàn)的相關(guān)情況是：健康人樣本中很多標志物的濃度偏低，測量值低于標準曲線(xiàn)低值。

三、樣本收集有講究

以血清為例，樣本收集可參考試劑盒說(shuō)明書(shū)，但需注意以下要點(diǎn)。樣本盡量用無(wú)菌管收集，避免細菌的酶類(lèi)和代謝產(chǎn)品對結果的影響。采集過(guò)程要避免溶血，因為紅細胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會(huì )影響檢測。保存過(guò)程中如有沉淀，應離心后取上清液。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反復凍融，有能保證檢測結果的平行可比性。

四、實(shí)驗前要準備好相應試劑

提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境，這個(gè)過(guò)程大致需半小時(shí)左右。洗液是濃縮液，如有結晶析出，需溶解后再進(jìn)行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質(zhì)量，蛋白標準品為凍干粉，重溶前需將管子離心，加入說(shuō)明書(shū)的緩沖液，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻，至少 15 分鐘，不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據說(shuō)明書(shū)要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標準品時(shí)，建議用聚丙烯管(對蛋白吸附力很低)，每步都要充分混勻且更換新槍頭，確保梯度準確性。

五、儀器設備的準備

相關(guān)設備包括移液器、洗板機/搖床和酶標儀。移液器的準確性對于ELISA實(shí)驗結果的可靠性十分關(guān)鍵，需要確保定期校準維護。搖床的使用是為了讓反應體系快速達到平衡，獲得穩定、可重復的結果。不用搖床對實(shí)驗通常的影響是，OD 值低，CV 大。酶標儀等設備使用前提前15分鐘開(kāi)機預熱。

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