熒光定量PCR耗材如何使用及選擇需注意事項 ！

　　本生生物詳解：高通量的96孔PCR板和8聯(lián)管是在聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中，主要作為參與擴增反應的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。醫療級聚丙烯(PP)材質(zhì)因其*的純凈度和穩定性，能更好適應PCR反應過(guò)程中反復高低溫設定，并且能夠實(shí)現高溫高壓滅菌操作，常常被用于PCR耗材的生產(chǎn)。隨著(zhù)熒光定量PCR技術(shù)的普及，該技術(shù)被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫藥等領(lǐng)域，不僅應用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA，RNA的研究領(lǐng)域。

　　如何正確使用96孔PCR孔板?

　　>PCR板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR儀(如伯樂(lè )CFX系列，ABI 7500fast 以上型號， Roche 480系列)，但如果熒光定量PCR儀是底部光源的，則應選擇透明的。

　　>PCR板根據裙邊設計又可分為無(wú)裙邊、半裙邊和全裙邊三種設計模式，不同廠(chǎng)家的熒光定量PCR儀會(huì )設計不同的切角或邊緣凸起，請選擇適合該PCR儀的板子。

　　>PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板)，根據機型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導致數據失真。

　　>當使用96孔板做熒光定量PCR實(shí)驗的時(shí)候，推薦使用光學(xué)膜代來(lái)密封反應孔。正確的封膜方法是：先沿著(zhù)96孔板的縱向壓膜，然后橫向，最后沿著(zhù)板的邊緣按壓使之密封。具體手法見(jiàn)下面圖示：

　　加樣后會(huì )在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應體系內也會(huì )有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專(zhuān)用的微孔板離心機解決上述問(wèn)題。

　　PCR板屬于一次性消耗品，生產(chǎn)一次成型，不建議剪開(kāi)使用容易造成實(shí)驗誤差增加，不能清洗或部分重復利用。不要為了節省一點(diǎn)小錢(qián)，而給實(shí)驗帶來(lái)后續分析上的困擾。

　　樣本量少，用8聯(lián)管做實(shí)驗又該注意哪些呢?

　　>8聯(lián)管也分乳白和透明兩種，選擇方式和孔板一樣，根據PCR儀的熒光信號采集方式?jīng)Q定。

　　>8聯(lián)管同樣也有0.1ml(矮管)和0.2ml(高管)，根據PCR儀的加熱模塊體積確定。

　　>8聯(lián)管的蓋子一般有光學(xué)平蓋和凸型圓蓋之分，光學(xué)平蓋適用于熒光定量PCR，圓蓋適用于普通PCR。

　　>使用單管或8聯(lián)管做實(shí)驗，并且樣本數量不多的時(shí)候，建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱(chēng)地安放樣品，最好是縱向放置，并且優(yōu)先放在第6列或第7列，然后逐漸向兩邊放置。這樣做的好處是熱蓋壓下來(lái)的時(shí)候不至于發(fā)生傾斜，各個(gè)反應管的受力和受熱都比較均勻，提高孔與孔之間的數據精密性。也可以在加熱模塊四角的位置，放置4個(gè)單管平衡熱蓋壓力，避免擴增少量樣本時(shí)出現管子變形的情況。

　　>管蓋沒(méi)有蓋好造成PCR反應液熱蒸發(fā)，影響反應溫度的準確控制及反應也各成份的濃度，同時(shí)也成為一個(gè)污染源。不但會(huì )因壓蓋時(shí)由于粗心或者用力不均致使部分蓋子變形，而且還會(huì )造成樣品的交叉污染，所以我們推薦用獨立管蓋的8聯(lián)管，每管蓋一體，確保樣本獨立反應，避免交叉污染。