動(dòng)物細胞培養中動(dòng)物血清的作用

　?、偬峁┘毎婧驮鲋乘匦璧纳L(cháng)調節因子。

　?、谘a充基礎培養基中沒(méi)有或量不足的營(yíng)養成分。

　?、酆幸恍┛晒┵N壁細胞型細胞貼壁生長(cháng)的基質(zhì)成分。

　?、芴峁┹d體蛋白，可結合維生素、脂質(zhì)、金屬離子等。

　?、菰谝恍┣闆r下，中和毒性物質(zhì)保護細胞不受傷害。

　?、藿o培養液提供良好的緩沖系統。

　?、咛峁┑鞍酌敢种苿?，保護細胞免受死細胞釋放的蛋白酶的傷害。

　　但是血清也存在一些弊端，比如存在不少有害成分（補體、免疫球蛋白和一些生長(cháng)抑制因子等）；血清成分不明確，影響對結果的分析；不同動(dòng)物、不同批次的血清成分和活性有很大不同，使得培養結果不穩定。

　　盡管如此，血清仍然是培養液中基本的添加物，尤其是在原代培養或細胞生長(cháng)狀態(tài)不良時(shí)，常常會(huì )先使用有血清的培養液進(jìn)行培養，待細胞生長(cháng)旺盛后再換成無(wú)血清培養液。

　　血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種，是細胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，其中有些氨基酸動(dòng)物細胞本身不能合成（稱(chēng)為必需氨基酸），必須由培養液提供。血清激素有胰島素、生長(cháng)激素等及多種生長(cháng)因子（如表皮生長(cháng)因子、成纖維細胞生長(cháng)因子、類(lèi)胰島素生長(cháng)因子等）；血清還含有多種未知的促細胞生長(cháng)因子、促貼附因子及其他活性物質(zhì)，能促進(jìn)細胞的生長(cháng)、增殖和貼附。因此，細胞培養時(shí)，要保證細胞能夠順利生長(cháng)和增殖，一般需添加10%～20%的血清，動(dòng)物血清還可起到酸堿度緩沖液的作用.

　　動(dòng)物血清保存的注意事項：

　　一、需要長(cháng)期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月.由于血清結冰時(shí)體積會(huì )增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jì)隽?

　　二、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過(guò)程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分（complement）滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會(huì )造成血清沉淀物顯著(zhù)增多,而且還會(huì )影響血清的質(zhì)量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化.

　　三、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現沉淀.

　　四、一般廠(chǎng)商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌.如發(fā)現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過(guò)濾,切勿直接過(guò)濾血清.

　　五、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì )影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì )顯著(zhù)增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀(guān)察象"小黑點(diǎn)",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì )影響細胞生長(cháng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.

　　六、切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì )變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì )破會(huì )而影響血清質(zhì)量.