克氏雙糖鐵瓊脂的原理及使用方法

　　克氏雙糖鐵瓊脂的原理及使用方法

　　一、用途和原理：

　　克氏雙糖鐵瓊脂(Kligler Iron Agar)用于鑒別腸道菌發(fā)酵葡萄糖和乳糖，及產(chǎn)生lhq的生化反應。

　　蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì);乳糖、葡萄糖為可發(fā)酵糖類(lèi)，其產(chǎn)酸時(shí)通過(guò)酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為lhq，與鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑。

　　二、使用方法：

　　1、稱(chēng)取克氏雙糖鐵瓊脂55g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝試管(裝量宜多些)，121℃高壓滅菌15min，制成高層斜面，冷卻后備用。

　　2、挑取待檢菌的新鮮培養物，穿刺接種混合克氏雙糖鐵瓊脂斜面。接種時(shí)先在斜面劃線(xiàn)，然后再穿刺底層。

　　3、將試管放入培養箱內36±1℃培養18—24h。

　　4、觀(guān)察結果。觀(guān)察斜面與底層的反應情況。

　　三、質(zhì)量控制：

　　配成的培養基為紅色，下列菌株接種后于36±1℃培養24h結果如下：

　　四、常見(jiàn)問(wèn)題：

　　(1)克氏雙糖鐵試驗時(shí)間為什么要控制在18-24h?KIA時(shí)間長(cháng)了會(huì )怎樣,短了會(huì )怎樣?

　　答：時(shí)間短了細菌發(fā)酵不夠充分,現象不明顯。時(shí)間長(cháng)了細菌發(fā)酵過(guò)度,因為KIA是利用酸堿指示劑顯色的，時(shí)間長(cháng)了自然會(huì )引起一些改變而影響判斷，同時(shí)各種副反應也會(huì )造成很大影響。相對來(lái)說(shuō),時(shí)間稍微長(cháng)一點(diǎn)兒影響不大，但不能長(cháng)得太夸張。

　　(2)MIU試驗,為什么大腸埃希菌培養24h之后，培養基出現了氣泡?志賀菌的培養基就沒(méi)有?

　　答：因為大腸埃希菌是產(chǎn)氣的,而志賀菌不產(chǎn)氣。

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