Elisa小課堂：ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附測定類(lèi)型及操作過(guò)程

　　Elisa小課堂：ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附測定類(lèi)型及操作過(guò)程

　　ELISA試劑盒雙抗體夾心法檢查抗原

　　雙抗體夾心法是檢查抗原zui常用的辦法，但要留意的是在一步法(待測抗原與酶標抗體一同參加反響)測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標抗體，而不再構成“夾心復合物"呈現鉤狀效應，乃至可不顯色而呈現假陰性成果。因而在使用一步法試劑測定標本中含量可反常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時(shí)，應留意可測規模的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類(lèi)試劑可削弱鉤狀效應。 雙抗體夾心法測抗原的另一留意點(diǎn)是類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)的攪擾。RF是一種本身抗體，多為IgM型，能和多種動(dòng)物IgG的Fc段。用作雙抗體夾心法檢查的血清標本中如富含RF，它可充任抗原成份，一同與固相抗體和酶標抗體，表現出假陽(yáng)性反響。雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能構成兩位點(diǎn)夾心。

　　雙抗體夾心法的扼要操作過(guò)程為：

　　1)先參加抗體，使抗體固定于載體外表;

　　2)再加樣品，使目標檢查抗原構成抗原-抗體復合物;

　　3)加酶標抗抗體(第二種動(dòng)物抗抗原的酶標抗體);

　　4)參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測抗原的量成正比。

　　ELISA試劑盒競賽法檢查抗原

　　當小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個(gè)以上的抗體位點(diǎn)，因而不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，能夠選用競賽法形式。辦法的基本原理可見(jiàn)圖2，經(jīng)洗刷后分成兩組：一組加酶符號抗原和被測抗原的混合液，而另一組只加酶符號抗原，再經(jīng)孵育洗刷后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的不知道抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

　　競賽法的扼要操作過(guò)程：

　　1)先參加抗體，使抗體固定于載體外表;

　　2)參加梯度濃度比例的待測樣品與酶標抗原混合物,一同做只加酶標抗原的對照組;

　　3)參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，比照實(shí)驗組及對照組的顯色區別，計算不知道抗原的量。

　　雙抗原夾心法檢查抗體

　　雙抗原夾心法的反響形式與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶物，以檢查相應的抗體。與間接法測抗體的不一樣之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋?zhuān)芍苯佑糜跍y定，因而其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢查常選用本法。本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，應根據抗原構造的不一樣，尋覓適宜的符號辦法。

　　雙抗原夾心法的扼要操作過(guò)程為：

　　1)先參加抗原，使抗體固定于載體外表;

　　2)再加樣品，使目標檢查抗體構成抗原-抗體復合物;

　　3)加酶標抗原;

　　4)參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

　　間接法檢查抗體

　　間接法是檢查抗體常用的辦法。其原理為使用酶符號的抗抗體(辣根過(guò)氧化物酶符號的兔抗人免疫球蛋白抗體)以檢查與固相抗原的受檢抗體(人免疫球蛋白)，故稱(chēng)為間接法。本法主要用于對病原體抗體的檢查而進(jìn)行流行癥的確診。間接法的長(cháng)處是只需改換包被抗原就可使用同一酶標抗抗體樹(shù)立檢查相應抗體的辦法。

　　間接法的扼要操作過(guò)程：

　　1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)合，構成固相抗原;

　　2)加稀釋的受檢血清，保溫反響。血清中的特異抗體與固相抗原，構成固相抗原抗-體復合物;3)加酶標抗抗體;

　　4)參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

　　ELISA試劑盒競賽法檢查抗體

　　競賽法測抗體的反響形式與競賽法測抗原相似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶物，以檢查相應的抗體。當抗原材料中的攪擾物質(zhì)不易除去，或不易得到滿(mǎn)足的純化抗原時(shí)，可用此法檢查特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競賽與固相抗原。標本中抗體量越多，在固相上的酶標抗體愈少，因而陽(yáng)性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。競賽法測抗體有多種形式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競賽，抗HBc ELISA通常選用此法。另一種形式為將標本與抗原一同參加到固相抗體中進(jìn)行競賽，洗刷后再參加酶標抗體，與在固相上的抗原反響?？笻Be的檢查通常選用此法。

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