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【BUNSEN本生】ELISA試劑盒的原理及儲存方法?
ELISA試劑盒為捕獲抗體具有高親和力、高特異性、低內毒素的單抗,研究者以刺激劑激活細胞時(shí),不會(huì )影響活化細胞分泌細胞因子。ELISA試劑盒的原理是什么?
到目前為止,ELISA法仍在研究當中占有著(zhù)主流地位,普遍應用使得實(shí)驗更加方便、經(jīng)濟和準確, ELISPOT技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)也決定了它的發(fā)展潛力。LISPOT法來(lái)源于ELISA,相比較傳統的ELISA法有所突破,是定量ELISA技術(shù)的延伸和發(fā)展。由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同,使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結合,傳統的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內的抗體及CK的水平。
ELISA試劑盒的原理包括了可以提了兩款改良型siRNA用于活體轉染??梢栽黾觭iRNA-轉運試劑復合體的穩定性。而SIRNAPLUS則不需要轉運試劑,其轉運載體就整合在siRNA分子上。為了解決這一問(wèn)題,公司開(kāi)發(fā)了一個(gè)試劑盒,可以將shRNA插入到基因組的特定位置。這一靶向整合試劑盒采用鋅指核酸酶技術(shù),將 shRNAELISA試劑盒插入到人類(lèi)基因組的AAVS1位點(diǎn)。這一技術(shù)將shRNA定位在一個(gè)地方,使影響shRNA表達水平的一個(gè)重要變量固定下來(lái)。
ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗。在這種方法中,通常標準配體是固定的,通過(guò)加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來(lái)使之成鍵。通過(guò)加入與受體特異性反應的抗體來(lái)定量成鍵的受體,而且一開(kāi)始抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量。第二種抗體能識別抗體的末端,在其末端的堿性磷酸酯或過(guò)氧化物酶等與酶發(fā)生反應,從而使溶液顯色。
ELISA試劑盒:準備與貯存
ELISA試劑盒收到后立即貯存于2-8℃下,效期見(jiàn)試劑盒標簽;所有成分在2-8℃下可保存至有效期。使用前,所有試劑平衡至室溫,不同批次的試劑不能交換使用。
1. 包被板,96孔,包被了抗人胎球蛋白A抗體;微孔板固定于板架上,密封于含有干燥劑的鋁箔密封袋內;貯存于2-8℃至有效期。
2. 胎球蛋白A示蹤抗體,1瓶,0.6 ml,濃縮,HRP標記的抗人胎球蛋白A示蹤抗體溶于穩定的蛋白基質(zhì)中;此試劑使用前需用示蹤劑抗體稀釋液進(jìn)行稀釋;貯存于2-8℃至有效期。
3. 示蹤抗體稀釋液,1瓶,11ml,即用,Trizma鹽酸溶于緩沖液;根據實(shí)驗步驟用于示蹤抗體稀釋;貯存于2-8℃至有效期。
4. 試驗緩沖液,濃縮,1瓶,11ml,含牛血清白蛋白的磷酸緩沖鹽;建議使用前以1:10比例用雙蒸水稀釋(如11 ml濃縮+99 ml的雙蒸水);貯存于2-8℃至有效期。
5. 洗滌液,濃縮,1瓶,20ml,30倍濃縮;試驗前需用580ml的雙蒸水稀釋?zhuān)靹?一旦稀釋?zhuān)缓B氮化物防腐劑的磷酸緩沖鹽洗滌液會(huì )含表面活性劑;稀釋的洗滌液在室溫下可保存至效期。
6. HRP底物液;1瓶,12ml,含過(guò)氧化氫的TMB底物液;貯存于2-8℃至有效期。
7. 終止液,1瓶,12ml,0.5M硫酸,貯存于2-8℃至有效期。
8. 胎球蛋白A標準品,5瓶,含胎球蛋白A,不含疊氮化物防腐劑的液態(tài)牛血清基質(zhì);各標準品濃度見(jiàn)瓶子標簽;3次凍存周期使用后,所有標準品保存至-20℃或更低。
9. 胎球蛋白A質(zhì)控,2瓶,含人胎球蛋白A,不含疊氮化物防腐劑的液態(tài)牛血清基質(zhì),各質(zhì)控的精確濃度范圍見(jiàn)瓶子標簽,3次凍存周期使用后質(zhì)控保存至-20℃或更低。
保存——如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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