Elisa實(shí)驗：雙抗夾心法、間接法、競爭法優(yōu)缺點(diǎn)對比

　　Elisa實(shí)驗：雙抗夾心法、間接法、競爭法優(yōu)缺點(diǎn)對比

　　優(yōu)點(diǎn)：

　　雙抗夾心法：高靈敏、高專(zhuān)一性，抗原無(wú)須事先純化，孵育2次，操作簡(jiǎn)單，減少人為因素的影響，可靠的特異性。

　　間接法：二抗可以加強信號，而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它最多的免疫反應性。

　　競爭法：可適用比較不純的樣本，而且數據再現性很高。

　　競爭法 此法可用于抗原及半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測抗原和一定量的已知酶標抗原，使二者競爭地與固相抗體結合，經(jīng)過(guò)洗滌分離，zui后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關(guān)。

　　缺點(diǎn)：

　　雙抗夾心法：缺少鏈霉親和素的抗體，起不到型號放大作用，而且抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結合部位。

　　間接法：要經(jīng)過(guò)三次孵育，操作步驟繁瑣，稍微不注意會(huì )導致操作誤差，交互反應發(fā)生的機率較高。間接法 此法是檢測抗體常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測血清(抗體)與之結合，洗滌后，加酶標抗體和底物進(jìn)行測定。

　　競爭法：競爭法對于手法要求非常高，整體的敏感性和專(zhuān)一性都較差。

　　雙抗體夾心法測抗原：雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。

　　雙抗原夾心法測抗體：反應模式與雙抗體夾心法類(lèi)似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋?zhuān)芍苯佑糜跍y定，因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。

　　間接法：是檢測抗體zui常用的方法，本法主要用于對病原體抗體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷。

　　競爭法測抗體：當抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合?？笻Be的檢測一般采用此法。

　　競爭法測抗原：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

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