<object id="ugmi0"></object>
<samp id="ugmi0"></samp>
<object id="ugmi0"></object><object id="ugmi0"><option id="ugmi0"></option></object>
<object id="ugmi0"></object>
<object id="ugmi0"></object>
<sup id="ugmi0"></sup>
<object id="ugmi0"></object>
<sup id="ugmi0"></sup>
<sup id="ugmi0"><wbr id="ugmi0"></wbr></sup>
<sup id="ugmi0"><option id="ugmi0"></option></sup>
<object id="ugmi0"></object>
<object id="ugmi0"><noscript id="ugmi0"></noscript></object>
歡迎來(lái)到本生(天津)健康科技有限公司網(wǎng)站!
網(wǎng)站導航
技術(shù)文章
當前位置:主頁(yè) > 技術(shù)文章 >人ELISA試劑盒的正確使用說(shuō)明講解

人ELISA試劑盒的正確使用說(shuō)明講解

更新時(shí)間:2023-11-13    點(diǎn)擊次數:886

  人ELISA試劑盒的正確使用說(shuō)明講解


  l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人熱休克蛋白70(HSP-70)的含量。

  l 有效期:6個(gè)月

  l 保存條件:2-8℃

  l 本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷

  實(shí)驗原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人熱休克蛋白70(HSP-70)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人熱休克蛋白70(HSP-70)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

  樣本處理及要求

  1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

  2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

  3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會(huì )影響測量結果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

  4. 細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

  注:標本溶血會(huì )影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。

  需要而未提供的試劑和器材

  1. 酶標儀(450nm)

  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3. 37℃恒溫箱

  4. 蒸餾水或去離子水

  試劑盒組成

  名稱(chēng)96孔配置48孔配置備注

  微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無(wú)

  標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)

  樣本稀釋液6mL3mL無(wú)

  檢測抗體-HRP10mL5mL無(wú)

  20×洗滌緩沖液25mL15mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

  底物A6mL3mL無(wú)

  底物B6mL3mL無(wú)

  終止液6mL3mL無(wú)

  封板膜2張2張無(wú)

  說(shuō)明書(shū)1份1份無(wú)

  自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)

  備注:

  1. 標準品濃度依次為:160、80、40、20、10、5 pg/mL

  2. 經(jīng)過(guò)大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實(shí)驗過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過(guò)最大標準品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標本進(jìn)行適當稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗。

  注意事項

  1. 嚴格按照規定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

  2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

  3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

  4. 底物顯色液應呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

  5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

  6. 在儲存和溫育時(shí)避免強光直接照射。

  7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

  8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會(huì )破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

  9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

  10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

  試劑準備

  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

  20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

  操作步驟

  1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

  實(shí)驗結果計算

  以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線(xiàn),并得到直線(xiàn)回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

  試劑盒性能:

  1. 檢測范圍:5 pg/mL – 160 pg/mL。

  2. 靈敏度:檢測濃度小于1.0 pg/mL。

  3. 特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

  4. 重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。

  人Elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng),較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng),是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng )美好的未來(lái)。

如果您有任何問(wèn)題,請跟我們聯(lián)系!

聯(lián)系我們

版權所有©2024 本生(天津)健康科技有限公司 備案號:津ICP備19006588號-2 sitemap.xml 技術(shù)支持:制藥網(wǎng) 管理登陸

地址:天津市武清開(kāi)發(fā)區創(chuàng )業(yè)總部基地五號樓

在線(xiàn)咨詢(xún) 聯(lián)系方式 二維碼

服務(wù)熱線(xiàn)

15502280048

掃一掃,關(guān)注我們

<object id="ugmi0"></object>
<samp id="ugmi0"></samp>
<object id="ugmi0"></object><object id="ugmi0"><option id="ugmi0"></option></object>
<object id="ugmi0"></object>
<object id="ugmi0"></object>
<sup id="ugmi0"></sup>
<object id="ugmi0"></object>
<sup id="ugmi0"></sup>
<sup id="ugmi0"><wbr id="ugmi0"></wbr></sup>
<sup id="ugmi0"><option id="ugmi0"></option></sup>
<object id="ugmi0"></object>
<object id="ugmi0"><noscript id="ugmi0"></noscript></object>
龙口市| 余江县| 麻栗坡县| 海晏县| 留坝县| 禄丰县| 南部县| 龙山县| 阿尔山市| 安化县| 招远市| 昌邑市| 灵宝市| 永宁县| 贵定县| 保亭| 班戈县| 南丹县| 灵武市| 杭锦后旗| 英吉沙县| 海伦市| 泾源县| 邛崃市| 乌鲁木齐市| 高台县| 沾化县| 富川| 获嘉县| 泉州市| 石家庄市| 平乐县| 和田县| 隆昌县| 资溪县| 洛隆县| 桂林市| 武夷山市| 沐川县| 松滋市| 勃利县| http://444 http://444 http://444 http://444 http://444 http://444